產(chǎn)品名稱:Coelenterazine f 腔腸素f

品牌：nanolight

貨號：

CAT#345腔腸素 F

腔腸素F是優(yōu)選的底物 為 水母發(fā)光蛋白

 

 

• 腔腸素f詳細信息：

包裝內(nèi)容：

500 ugs – 1 瓶 500 ugs 凍干 CTZ-f 
1 mgs – 2 瓶 500 ugs 凍干 CTZ-f 
5 mgs – 1 瓶 5 mg 凍干 CTZ-f 
10 mgs – 2 瓶 5 mg 凍干 CTZ-f

好處

• 為每組實驗預(yù)先分裝少量新鮮底物
• 保質(zhì)期長（在氬氣下包裝）
• 由于其精細的晶體結(jié)構(gòu)，溶解速度更快
• 等分試樣之間的質(zhì)量一致

熒光素以過濾、凍干、批次控制的底物形式運輸

• 腔腸素f產(chǎn)品信息

  背景描述

  腔腸素（Coelenterazine）是自然界中資源豐富的天然熒光素，是絕大多數(shù)海洋發(fā)光生物（超過75%）的光能貯存分子。腔腸素可作為許多熒光素酶的底物，比如海腎熒光素酶（Rluc），Gaussia分泌型熒光素酶（Gluc），以及包括水母發(fā)光蛋白（aequorin）和藪枝螅發(fā)光蛋白（Obelia）在內(nèi)的光蛋白（Photoproteins）。其發(fā)光原理是：以腔腸素為底物的熒光素酶在有分子氧的條件下，氧化腔腸素，產(chǎn)生高能量的中間產(chǎn)物，并在此過程中發(fā)射藍色光，峰值發(fā)射波長約為450~480nm。

  腔腸素作為水母發(fā)光蛋白復(fù)合物（Aequorin）的組成成分，只有與鈣離子（Ca2+）結(jié)合后，才能被氧化生成高能量產(chǎn)物Coelenteramide，同時釋放出CO2和藍色熒光（~466nm）（圖1）。其具有以下幾個優(yōu)點：1）能檢測較大范圍的Ca2+濃度（0.1-100μM）；2）樣品無自體熒光，背景熒光較低，盡管信號較熒光鈣離子指示劑弱，但信噪比更高，因此具有較高靈敏度；3）Aequorin能夠穩(wěn)定維持在細胞內(nèi)，能夠進行數(shù)小時至數(shù)天Ca2+的監(jiān)測。

  

  圖1. 腔腸素作為水母發(fā)光蛋白輔助因子的Ca2+依賴反應(yīng)流程

  腔腸素具有能量轉(zhuǎn)移（Bioluminescence Resonance Energy Transfer，BRET）的特性：在底物腔腸素存在的情況下，熒光素酶（如Rluc）催化底物發(fā)生藍光，能量轉(zhuǎn)移到EYFP（增強的黃色熒光蛋白），發(fā)出綠光（~530nm）。通過Rluc融合蛋白和EYFP融合蛋白兩者間的相互關(guān)系研究蛋白-蛋白之間的相互作用。BRET的信號可通過比較綠光和藍光的量來進行測定，消減了因細胞數(shù)、細胞類型和其他實驗變量而引起的數(shù)據(jù)變量。

  主要應(yīng)用

  1. 活體成像。

  2. 報告基因檢測。

  3. 檢測細胞/組織內(nèi)活性氧（ROS）水平：細胞和組織內(nèi)的超氧陰離子和過氧化亞硝基陰離子能夠增強腔腸素在酶非依賴性的氧化體系中自發(fā)熒光。

  4. 高通量篩選。

  5. 監(jiān)測活細胞內(nèi)鈣離子水平。

  產(chǎn)品描述

  腔腸素f（Coelenterazine f）系天然腔腸素衍生物，是水母發(fā)光蛋白的優(yōu)先選擇的底物。腔腸素f與天然腔腸素結(jié)構(gòu)上的差別在于氟（F）原子替換R-1位酚基上的羥基。腔腸素f和水母蛋白被氧化后活化，生成腔腸素的亞穩(wěn)態(tài)復(fù)合物。該復(fù)合物生成時間非常短，而天然腔腸素-水母蛋白復(fù)合物的生成反應(yīng)很慢（60min內(nèi)僅有40%的天然腔腸素完成反應(yīng)）。與天然腔腸素-水母蛋白復(fù)合物產(chǎn)生的光子總數(shù)相比，此復(fù)合物僅產(chǎn)生80%的光子能。

  腔腸素f與Ca2+接觸時，可快速且高產(chǎn)量的發(fā)光，產(chǎn)能強度是天然腔腸素的20倍。同時，腔腸素f具有良好細胞滲透性。當(dāng)需要*的Ca2+檢測靈敏度來研究水母蛋白再生實驗時，推薦使用本底物。

  產(chǎn)品性質(zhì)

  英文別名（English synonym）	CLZ-F; CLZN-F; Coelenterazine-Fluoride
  CAS號（CAS NO.）	123437-16-1
  分子式（Formula）	C26H20FN3O2
  分子量（Molecular weight）	425.46g/mol
  外觀（Appearance）	黃色至褐色粉末
  溶解性（Solubility）	溶于甲醇或者乙醇，不可溶于DMSO
  純度（Purity）（TLC）	>95%
  結(jié)構(gòu)（Structure）

  運輸和保存方法

  冰袋運輸。粉末-20℃避光干燥保存，最好保存在惰性氣體環(huán)境下，避免接觸空氣。

  腔腸素f工作液的配制

  腔腸素f溶解：不溶于水。毒性低的溶劑是100%乙醇，可配制濃度為0.1-1mg/ml。加入pH低于7.0的酸性緩沖液（堿性pH會快速降解底物）稀釋成低濃度工作液。切忌溶于DMSO。

  腔腸素f保存：建議溶液現(xiàn)配現(xiàn)用！體外實驗，需將稀釋后的工作液室溫放置20-30min，方可穩(wěn)定工作。該工作液可室溫穩(wěn)定放置3-4h，有非常微弱的信號衰減發(fā)生。不建議儲存液-20℃或更低溫度保存，因為其高能量的二氧環(huán)丁酮結(jié)構(gòu)即使在低溫的情況下也會發(fā)生降解，導(dǎo)致熒光強度明顯變?nèi)酢６虝r間保存條件：-70℃避光保存于塑料管內(nèi)（溶液中不含有Ca2+），且有惰性氣體保護。

  注意事項

  1. 粉末最好使用惰性氣體（氮氣或氬氣），在密封良好的塑料管中避光保存于-20℃，長期保存于-70℃。管內(nèi)即使存在少量空氣，可能造成腔腸素n氧化失活，造成在不同試驗間的量化分析結(jié)果無法比較。

  2. 本品接觸空氣，水或者任何氧化試劑會不穩(wěn)定。

  附錄1. 腔腸素及其衍生物的特性

  產(chǎn)品名稱	基本描述
  天然腔腸素 Coelenterazine native	水母發(fā)光蛋白的輔助因子，高靈敏度化學(xué)發(fā)光法檢測Ca2+濃度（0.1~100µM）。常用作Rluc和Gluc等熒光素酶的報告基因檢測底物。BRET分析，以及細胞/組織樣本中的超氧陰離子和過氧化亞硝基陰離子的化學(xué)發(fā)光檢測。快速再生能力比較重要的實驗推薦使用本底物。
  腔腸素h Coelenterazine h	一種水母發(fā)光蛋白復(fù)合物，其發(fā)光強度比天然腔腸素高10倍以上。適用于報告基因分析。
  腔腸素hcp Coelenterazine hcp	腔腸素hcp-水母發(fā)光蛋白復(fù)合物的熒光強度比天然腔腸素復(fù)合物高190倍，且量子產(chǎn)量高和Ca2+反應(yīng)速度快。
  腔腸素cp Coelenterazine cp	Coelenterazine cp 光蛋白復(fù)合物的發(fā)光強度是天然腔腸素的15倍，且具有更快的Ca2+反應(yīng)性。
  腔腸素f Coelenterazine f	腔腸素f-光蛋白復(fù)合物的發(fā)光強度是天然腔腸素的20倍。其具有良好的細胞滲透性。當(dāng)需要*的檢測Ca2+靈敏度研究水母蛋白再生實驗研究中，推薦使用本底物。
  腔腸素n Coelenterazine n	所有的腔腸素衍生物中熒光強度是最弱的，且對Ca2+反應(yīng)速率也明顯低于天然腔腸素。非常有用的Ca2+低靈敏檢測底物。
  腔腸素e Coelenterazine e	具有最高的體外水母發(fā)光蛋白反應(yīng)性，且具有雙發(fā)射峰，可在pCa5-7范圍內(nèi)通過雙波長的比例測定Ca2+濃度，從而提高檢測精確性。腔腸素e的熒光強度是天然腔腸素的137%。
  2-methyl Coelenterazine 二甲基腔腸素	可高效作用于ROS（如單態(tài)氧、超氧陰離子），是一種已報道的強抗氧化劑。
  腔腸素 400a Coelenterazine 400a	BRET研究中Rluc的優(yōu)選底物。在390nm和400nm之間發(fā)藍色光，對GFP受體蛋白的光發(fā)射干擾最小。不可作為Gluc底物。
  RLC=相對發(fā)光容量：相對于天然aequorin，飽和Ca2+中aequorin的總時間積分發(fā)射=1.0 **Half-Rise Time：Half-Rise Time是將1mmCa2+添加到用所需的克倫他嗪類似物重建的aequorin標(biāo)準(zhǔn)中后，發(fā)光信號達到最大值50%的時間。 所有數(shù)據(jù)都來自 O. Shimomura in Cell Calcium 14, 373 (1993).

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